活體成像技術（optical in vivo imaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內，與后期注射入體內的底物發(fā)生反應，利用光學系統(tǒng)檢測光強度，間接反映出細胞數量的變化或細胞的定位。這項技術已被廣泛應用于多個領域，常用的有腫瘤或疾病動物模型的建立，并可用于病毒學研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質相互作用研究等。
常見的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲熒光素酶（firefly luciferase，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同），當底物過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。
D-Luciferin（D-熒光素），D-Luciferin：常見的三種
1.D-Luciferin, Sodium Salt/D-熒光素鈉鹽、
2.D-Luciferin, Potassium Salt/D-熒光素鉀鹽
3.D-Luciferin Firefly,free acid/D-螢火蟲熒光素
常用且代表性產品為D-Luciferin, Potassium Salt/D-熒光素鉀鹽，貨號是122799，品牌是PerkinElmer/Revvity?，F貨代理商是靶點科技。常年現貨，隨時發(fā)貨。技術咨詢和產品說明書聯系我們技術部。
122799品牌PerkinElmer/Revvity小動物活體成像底物操作使用
D-Luciferin, Potassium Salt/D-熒光素鉀鹽
分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O
分子量：320.32 g/mol
應用：
1）活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析；
2）廣泛用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析；
Protocol 1：In Vitro Bioluminescent Assays/ 體外生物發(fā)光檢測
1）配制成100 mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。
2）用預熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配制工作液(終濃度150μg/mL)。
3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基直至無殘留。
4）圖像分析前立即向細胞內添加1×熒光素工作液，然后進行IVIS成像系統(tǒng)圖像分析（或者細胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）。
Protocol 2：In vivo analysis in mice / 小鼠活體成像分析
1）用無菌的DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，0.2um濾膜過濾除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。
2）按10 μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應量的15mg/mL熒光素溶液；
3）腹腔注射10-15 min后，IVIS成像系統(tǒng)進行成像分析。（對每只動物模型做熒光素動力學研究以確定峰值信號獲取時間）
